甲氧基、乙氧基与羟丙氧基测定法

0712 甲氧基、乙氧基与羟丙氧基测定法
    本法系采用气相色谱法（通则0521）或容量法测定甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙纤维素或羟丙甲纤维素等药用辅料中所含的甲氧基、乙氧基和羟丙氧基。
    可选择第一法或第二法测定，当第二法测定结果不符合规定时，应以第一法测定结果为判定依据。
    第一法（气相色谱法）
    色谱条件与系统适用性试验 用25%苯基-75%甲基聚硅氧烷为固定液，涂布浓度为20%的填充柱，或用6%氰丙基苯基-94%二甲基硅氧烷（或极性相近的固定液）为固定液的毛细管色谱柱；起始温度为100℃，维持8分钟，再以每分钟50℃的速率升温至230℃，维持2分钟；进样口温度为200℃，检测器[氢火焰离子化检测器（FID）或热导检测器（TCD）]温度为250℃。理论板数按正辛烷峰计算不低于1500（填充柱）或10000（毛细管柱），对照品峰与内标物质峰的分离度应符合要求。取对照品溶液1μl注入气相色谱仪，连续进样5次，计算校正因子，相对标准偏差应不大于3.0%。
    测定法 取供试品约65mg，精密称定，置已称重的反应瓶中（可取10ml的顶空进样瓶），加己二酸80mg，精密加入内标溶液（取正辛烷0.5g，置100ml量瓶中，加邻二甲苯溶解并稀释至刻度，摇匀，即得）与57%氢碘酸溶液各2ml， 密封，精密称定，于130～150℃振荡60分钟，或在130～150℃加热30分钟后，剧烈振摇5分钟，继续在130～150℃ 加热30分钟，冷却，精密称定，若减失重量小于反应瓶中内容物的0.50%，且无渗漏，可直接取混合液的上层液体作为供试品溶液；若减失重量大于反应瓶中内容物的0.50%，则应按上法重新制备供试品溶液。另取己二酸 80mg，置已称重的反应瓶中，精密加入内标溶液与57%氢碘酸溶液各2ml，密封，精密称定，根据供试品中所含甲氧基、乙氧基和羟丙氧基的量，用注射器穿刺加入相应的碘甲烷、碘乙烷和2-碘丙烷对照品，精密称定，两次称重结果相减即为对照品的加入量。振摇约30秒，静置，取上层液体作为对照品溶液。取供试品溶液与对照品溶液各1μl，分别注入气相色谱仪，记录色谱图，按内标法以峰面积计算，并将结果乘以系数[碘甲烷（分子量141.94）转换为甲氧基（分子量31.03）系数为0.2186；碘乙烷（分子量155.97）转换为乙氧基（分子量45.06）系数为0.2889； 2-碘丙烷（分子量169.99）转换为羟丙氧基（分子量75.09）系数为0. 4417]，即得。
    第二法（容量法）
    1.羟丙氧基测定
    仪器装置 如图1。图中D为25ml双颈蒸馏瓶，侧颈与外裹铝箔的长度为95mm的分馏柱E相连接；C为接流管，末端内径为0.25～1.25mm，插入蒸馏瓶内；B为蒸汽发生管（25mm×150mm），亦具末端内径为0.25～1.25mm的气体导入管，并与C相通；F为冷凝管，外管长100mm，与E连接；G为125ml具刻度的带玻塞锥形瓶，供收集馏液用。D与B均浸入可控温的电热油浴A中，维持温度为 155℃。
    
    测定法 取各品种项下规定量的供试品，精密称定，置蒸馏瓶D中，加30%（g/g）三氧化铬溶液10ml。于蒸汽发生管B中装入水至近接头处，连接蒸馏装置。将B与D均浸入油浴中（可为甘油），使油浴液面与D瓶中三氧化铬溶液的液面相一致。开启冷却水，必要时通入氮气流并控制其流速为每秒钟约1个气泡。于30分钟内将油浴升温至155℃， 并维持此温度至收集馏液约50ml，将冷凝管自分馏柱上取下，用水冲洗，洗液并入收集液中，加酚酞指示液2滴，用氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）滴定至pH值为6.9～7.1（用酸度计测定），记录消耗滴定液的体积V1（ml），而后加碳酸氢钠0.5g与稀硫酸10ml，静置至不再产生二氧化碳气体为止，加碘化钾1.0g，密塞，摇匀，置暗处放置5分钟，加淀粉指示液1ml，用硫代硫酸钠滴定液（0.02mol/L）滴定至终点，记录消耗滴定液的体积V2（ml）。另做空白试验，分别记录消耗的氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）与硫代硫酸钠滴定液（0.02mol/L）的体积Va与Vb（ml），按下式计算，即得。
    
    式中 K为空白校正系数（M1Va）/（M2Vb）；
     V1为供试品消耗氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）的体积，ml；
     V2为供试品消耗硫代硫酸钠滴定液（0.02mol/L）的体积，ml；
     Va为空白试验消耗氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）的体积，ml；
     Vb为空白试验消耗硫代硫酸钠滴定液（0.02mol/L）的体积，ml；
     W为供试品的重量，g；
     M1为氢氧化钠滴定液的浓度，mol/L；
     M2为硫代硫酸钠滴定液的浓度，mol/L；
     0.0751为羟丙氧基（OCH2CHOHCH3）的毫摩尔质量。
    2.甲氧基测定
    仪器裝置 如图2。A为50ml圆底烧瓶，侧部具一内径为lmm的支管供导入二氧化碳或氮气流用；瓶颈垂直装有长约25cm、内径为9mm的直形空气冷凝管E，其上端弯曲成出口向下、并缩为内径2mm的玻璃毛细管，浸入内盛水约2ml的洗气瓶B中；洗气瓶具出口为一内径约7mm的玻璃管，其末端为内径4mm可拆卸的玻璃管，可浸入两个相连接的接收容器C、D中的第一个容器C内液面之下。
    
    测定法 取干燥的供试品（相当于甲氧基10mg），精密称定，置烧瓶中，加熔融的苯酚2.5ml与氢碘酸5ml，连接上述装置；另在两个接收容器内，分别加入10%醋酸钾的冰醋酸溶液6ml与4ml，再各加溴0.2ml；通过支管将CO2或N2气流缓慢而恒速地（每秒1～2个气泡为宜）通入烧瓶， 缓缓加热使温度控制在恰使沸腾液体的蒸气上升至冷凝管的半高度（约至30分钟使油液温度上升至135～140℃），在此温度下通常在45分钟可完成反应（根据供试品的性质而定， 如果供试品中含有多于两个甲氧基时，加热时间应延长到1～3小时）。而后拆除装置，将两只接收容器的内容物倾入250ml碘瓶（内盛25%醋酸钠溶液5ml）中，并用水淋洗使总体积约为125ml，加入甲酸0.3ml，转动碘瓶至溴的颜色消失，再加入甲酸0.6ml，密塞振摇，使过量的溴完全消失， 放置1～2分钟，加入碘化钾1.0g与稀硫酸5ml，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）相当于0.5172mg的甲氧基。
    【注意事项】
    （1）碘甲烷、碘乙烷和2-碘丙烷均为极易挥发性物质，应在进样前，打开反应瓶密封盖后，立即将上层液体移入进样瓶；进样瓶的密封性应良好。
    （2）碘甲烷、碘乙烷和2-碘丙烷均应避光保存，放置过程中释放出碘，使溶液颜色逐渐加深，每次测定前应进行纯度标化（见附注），含量计算时应进行折算。
    （3）57%氢碘酸可直接从市场购买，也可取市售的氢碘酸试剂置于全玻璃仪器中，加适量次亚磷酸，使氢碘酸的颜色由棕色变为无色，加热，同时缓缓通入氮气，收集126～127℃的馏分，纯化后的氢碘酸贮藏于有良好密封性的棕色玻璃瓶中，充氮保存。
    【附注】碘甲烷、碘乙烷和2-碘丙烷的标化
    1.纯度测定（气相色谱法） 避光操作。用6%氰丙基苯基-94%二甲基硅氧烷（或极性相近的固定液）为固定液的毛细管柱；起始温度为60℃，维持8分钟，再以每分钟10℃的速率升温至150℃，维持10分钟；进样口温度为200℃；检测器[氢火焰离子化检测（FID）或热导检测（TCD）]温度为250℃。取本品1μl注入气相色谱仪，记录色谱图，按峰面积归一化法计算主峰相对百分含量，不得低于99.5%。
    2.含量测定（容量法） 避光操作。取乙醇10ml，置100ml量瓶中，精密称定，加碘甲烷（或碘乙烷，或2-碘丙烷）精密称定，用乙醇稀释至刻度，摇匀；精密量取20ml，置100ml量瓶中，精密加硝酸银滴定液（0.1mol/L）50ml与硝酸2ml，时时振摇2小时，避光，放置过夜，继续时时振摇2小时，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液20ml，精密量取续滤液50ml，加硫酸铁铵指示液2ml，用硫氰酸铵滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml硝酸银滴定液（0.1mol/L）相当于14.19mg 的碘甲烷（CH3I）、15.60mg 的碘乙烷（C2H5I）或17.00mg的2-碘丙烷（C3H7I），含碘甲烷（或碘乙烷，或2-碘丙烷）不得低于98.0%。