重组人促红素体内生物学活性测定法

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3522 重组人促红素体内生物学活性测定法    （网织红细胞法）
    本法系依据人促红素（EPO）可刺激网织红细胞生成的作用，给小鼠皮下注射EPO后，其网织红细胞数量随EPO注射剂量的增加而升高。利用网织红细胞数对红细胞数的比值变化，通过剂量反应平行线法检测EPO体内生物学活性。
    试剂  （1）乙二胺四乙酸二钾抗凝剂  称取乙二胺四乙酸二钾100mg，加生理氯化钠溶液10ml溶解，混匀，使用时新鲜配制。
    （2）稀释液  称取0.1g牛血清白蛋白，加生理氯化钠溶液溶解并稀释至100ml，即得。
    标准品溶液的制备  按标准品说明书，将EPO标准品复溶，用稀释液将EPO标准品稀释成高、中、低3个剂量EPO标准品溶液。
    供试品溶液的制备  用稀释液将供试品稀释成高、中、低3个剂量与EPO标准品溶液单位相近的供试品溶液。
    测定法  按低、中、高（如10IU/鼠、20IU/鼠、40IU/鼠）3个剂量组，分别给近交系6~8周龄小鼠（雌性BALB/C小鼠）或B6D2F1小鼠皮下注射EPO标准品及供试品溶液，每组至少4只，每鼠注射量为不大于0.5ml。在注射后的第4天从小鼠眼眶采血3～4滴，置于预先加入乙二胺四乙酸二钾抗凝剂的采血管中。取抗凝血，用全自动网织红细胞分析仪计数每只小鼠血液中的网织红细胞数对红细胞总数的比值（Ret%）。按注射剂量（IU）对Ret%的量反应平行线测定法（通则1431）计算供试品体内生物学活性。

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