人血白蛋白多聚体测定法

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3121 人血白蛋白多聚体测定法    本法系用分子排阻色谱法测定人血白蛋白多聚体含量。
    照分子排阻色谱法（通则0514）测定。
    色谱条件与系统适用性试验 用亲水硅胶高效体积排阻色谱柱（SEC，排阻极限300kD，粒度10μm），柱直径7.5mm，长60cm；以含1%异丙醇的pH7.0、0.2mol/L磷酸盐缓冲液[量取0.5mol/L磷酸二氢钠200ml、0.5mol/L磷酸氢二钠420ml、异丙醇15.5ml 及水914.5ml，混匀]为流动相；检测波长为280nm；流速为每分钟0.6ml。取每1ml含蛋白质12mg的人血白蛋白溶液20μl，注入色谱柱，记录色谱图，人血白蛋白单体峰与二聚体峰间的分离度应大于1.5，拖尾因子按人血白蛋白单体峰计算应为0.95～1.40。
    
    测定法 取供试品适量，用流动相稀释成每1ml约含蛋白质12mg的溶液，取20μl，注入色谱柱，记录色谱图60分钟。
    按面积归一法计算，色谱图中未保留（全排阻）峰的含量（％） 除以2，即为人血白蛋白多聚体含量。

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