3420 伤寒Vi多糖分子大小测定法 本法用于测定细菌荚膜多糖在色谱柱中的分配系数(KD)和多糖在规定KD值以前的回收率。
试剂、色谱柱的制备与色谱柱标定 同通则3419第二法。
测定法 取供试品约1ml(含多糖抗原3~5mg),加至已标定的色谱柱中,用流动相洗脱,流速为每小时15~20ml,用组分收集器收集洗脱液,每管3~5ml。照O-乙酰基测定法(通则3117),测定每管洗脱液中O-乙酰基的含量,求出O-乙酰基含量最高时的洗脱体积,即为多糖主峰峰顶洗脱体积Ve。
按下式计算:
Ve —V0
KD=————————
V1—V0
式中 KD为供试品分配系数;
Ve为供试品洗脱液体积,ml;
V0为空流体积,ml;
V1为柱床体积,ml;
计算供试品在KD值≤0.25的多糖回收率:
Ax
Rx(%)=——————×100
At
式中 Rx为KD值≤0.25供试品的多糖回收率,%;
Ax为供试品在KD值≤0.25各管洗脱液等体积合并液的O-乙酰基含量;
At为供试品所有管洗脱液等体积合并液的O-乙酰的含量。
【附注】过柱操作在10~20℃进行。
(c)药标网 - 中国药典、兽药典质量标准在线查询(豫ICP备16032441号-1)